Fluo-3, AM是较常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针|121714-22-5详细内容
一.产品简述
Fluo-3, AM 是较常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一。
它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内，Fluo-3 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，较大激发波长为506nm，较大发射波长为526nm。
实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为525～530nm。
可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
二.具体参数
中文名称：钙离子荧光探针
英文名称：Fluo-3 AM(solution in acetonitrile)
CAS：121714-22-5
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.85
性状：红色粉末
端基取代率：> 95%
产地：西安
溶解性：溶于大部分**溶剂，如：DCM、DMF、DMSO、THF等等，在水中有很好的溶解性
处理和使用：取用时候需要注意温差，空气湿度，防止吸潮。在反应中尽可能地处于惰性气体保护中。
三.结构式
四.操作说明（for Human T cells）
1.试剂 2 mM 的Fluo-3, AM/DMSO（将1mg Fluo-3, AM 溶于442μL DMSO）；Pluronic F127；Hanks•balanced salt solution（HBSS）； HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM ，5mM KCl，1mM CaCl2，0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）
2.操作
①. 向Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以防止Fluo-3,AM 在HBSS 中聚合并能帮助其进入细胞。
②. 用HBSS 稀释Fluo-3, AM 溶液，制备4μM 的Fluo-3, AM 工作液。
③. 将Fluo-3, AM 工作液加入细胞，在37℃培养20 分钟。
④. 加入5 倍体积的含有1%胎牛的HBSS，再继续培养40 分钟。
⑤. 用HEPES buffer saline 洗涤细胞3 次，然后用HEPES buffer saline 使细胞重悬浮，制成1×105 cells/mL 的溶液。
⑥. 37℃下培养10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长506nm，发射波长526nm。
标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定较佳条件。以上方法仅供参考。
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